細(xì)胞培養(yǎng)專題——6孔板接種和換液

　　（1）問：我的細(xì)胞傳代很正常，但一種到六孔板里（不管加藥和對(duì)照），總有兩三個(gè)孔（隨機(jī)）細(xì)胞長(zhǎng)得不好，很小，像破碎了。有人遇到過這種情況嗎？到底是啥原因呢？請(qǐng)各位指點(diǎn)

　　答：可能跟你加液的溫度有關(guān)。如果你細(xì)胞剛剛拿出來?yè)Q液加液，培養(yǎng)基也是從4度冰箱拿出來不久，很容易細(xì)胞就會(huì)凍死了。建議你最好把培養(yǎng)基先在培養(yǎng)箱里邊孵育15min先。

　　另外，跟你細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)也有關(guān)。加藥之前的細(xì)胞可以用高點(diǎn)的血清濃度培養(yǎng)。保證細(xì)胞狀態(tài)良好。

　　或者放在37度水浴鍋里孵育也可以，或者是培養(yǎng)板本身的問題，你再換換其他培養(yǎng)板試試看。再有可能就是細(xì)胞狀態(tài)問題了，種板時(shí)的血清濃度調(diào)高試一下

　　（2）問：最近幾天，我用六孔培養(yǎng)板接種細(xì)胞，培養(yǎng)24小時(shí)后更換培養(yǎng)基，在更換培養(yǎng)基之前，顯微鏡觀察到細(xì)胞貼壁，狀態(tài)非常的好，更換了培養(yǎng)基后，立即用顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)每個(gè)孔中都近乎有一半的細(xì)胞表現(xiàn)出近乎死亡的狀態(tài)。細(xì)胞變得非常小，產(chǎn)生大量的碎片，而另一半的細(xì)胞一切正常，異常細(xì)胞與正常細(xì)胞之間存在一條分水嶺，上半個(gè)圓是好的，下半個(gè)圓就不好，這是怎么一回事？

　　答：你可以看一下是不是培養(yǎng)板沒放水平。有一回我也出現(xiàn)過這種情況。你的培養(yǎng)液如何，如果培養(yǎng)液過期，細(xì)胞就不會(huì)貼壁。換一點(diǎn)新配制的培養(yǎng)液試一試。我也經(jīng)常碰到，我想可能是板的問題，換一個(gè)牌子的板或換用培養(yǎng)瓶就沒問題了。不知樓主所需換液的培養(yǎng)板多不多，換培養(yǎng)基的時(shí)候如果沒有注意風(fēng)機(jī)的影響，特別是所需換液的培養(yǎng)板很多時(shí)，容易使細(xì)胞因風(fēng)吹失水而干縮破裂。如果如此，換液時(shí)應(yīng)該逐個(gè)培養(yǎng)板進(jìn)行，別怕浪費(fèi)吸管，注意操作的效率！